Сибирский федеральный университет

Перевод названия: METHOD FOR DETECTION OF TARGETS ASSOCIATED WITH CERTAIN DIAGNOSIS, IN BLOOD OF PATIENTS BASED ON DNA-APTAMER

Тип публикации: патент

Год издания: 2019

Аннотация:

Изобретение относится к области биотехнологии и медицины. Описан способ выявления в крови больных циркулирующих мишеней, ассоциированных с определенным диагнозом. Обрабатывают твердую фазу биоспецифическими реагентами, отделяют непрореагировавшую жидкую фазу, инкубируют с мишенью, ассоциированной с определенным диагнозом. Далее обрабатывают твердую фазу репортером, разделяют жидкую и твердую фазы. Проводят анализ твердой фазы. В качестве твердой фазы используют магнитные микрочастицы с ковалентно иммобилизованными молекулами стрептавидина, в качестве биоспецифического реагента для первой обработки твердой фазы используют ДНК-аптамер, связывающийся с поверхностью за счет гибридизации с меченным биотином олигонуклеотидом 5'-CGTGGTTACAGTCAGAGGAG-3'-Вio, комплементарным константному концевому участку ДНК-аптамера, а в качестве репортера - другой ДНК-аптамер, меченный конъюгатом того же олигонуклеотида с Са²⁺-регулируемым фотопротеином обелином. Техническим результатом изобретения является разработка более чувствительного, универсального, экспрессного и технологичного биолюминесцентного способа выявления мишеней, ассоциированных с определенным диагнозом, в крови пациентов. 3 ил., 2 пр.

FIELD: medicine.

SUBSTANCE: invention relates to biotechnology and medicine. Described is a method of detecting circulating targets in the blood of patients associated with a certain diagnosis. Solid phase is treated with biospecific reagents, the unreacted liquid phase is separated, incubated with the target associated with the certain diagnosis. Further, the solid phase is treated with a reporter, liquid and solid phases are separated. Solid phase is analyzed. Solid phase used is magnetic microparticles with covalently immobilized streptavidin molecules, biospecific reagent for first solid phase treatment is DNA-aptamer binding to surface by hybridization with biotin-labeled oligonucleotide 5'-CGTGGTTACAGTCAGAGGAG-3'-Bio, complementary to constant end portion of DNA-aptamer, and as reporter – another DNA-aptamer labeled with conjugate of same oligonucleotide with Ca²⁺-regulated photoprotein obelin.

EFFECT: more sensitive, universal, express and technological bioluminescent method for detecting targets associated with a certain diagnosis in patient's blood.

1 cl, 3 dwg, 2 ex

• Башмакова Евгения Евгеньевна
• Франк Людмила Алексеевна
• Красицкая Василиса Валерьевна

• РИНЦ (eLIBRARY.RU)