Сибирский федеральный университет

Перевод названия: On the issue of validation of the method for somatic mutations determining in Janus kinase-2 (JAK2V617F), calreticulin (CALR) and receptor of thrombopoietin (MPL) genes in the dry blood drops

Тип публикации: статья из журнала

Год издания: 2017

Идентификатор DOI: 10.17116/labs201763178-181

Ключевые слова: chronic myeloproliferative neoplasms, dry stains of blood, allele-specific RT-PCR, somatic mutations, V617F JAK2, CALR, Mpl, хронические миелопролиферативные неоплазии, сухие капли крови, аллель-специфическая полимеразная цепная реакция в режиме реального времени, соматические мутации JAK2V617F

Аннотация: Молекулярно-генетические исследования для определения соматических мутаций в генах янускиназы-2 (JAK2), кальретикулина (CALR) и рецептора тромбопоэтина (MPL) включены в клинические рекомендации ВОЗ в качестве основных диагностических критериев хронических миелопролиферативных неоплазий (ХМН). Однако высокая стоимость проведения редких молекулярно-генетических тестов в клинико-диагностических лабораториях, обслуживающих малонаселенные регионы, ограничивает доступность тестирования и своевременность диагностики онкогематологических заболеваний. Одним из альтернативных вариантов взятия и транспортировки образцов цельной крови для генетических исследований является использование собранных и высушенных на специальном бумажном носителе капель крови (сухие капли крови — СКК). Цель работы — сопоставление результатов выявления диагностически важных мутаций в генах JAK2, CALR и MPL при использовании стандартного тестирования проб венозной крови и образцов из СКК. Материал и методы. Исследование проводили на 105 образцах крови пациентов с верифицированным диагнозом ХМН и известным мутационным статусом, а также на 36 образцах здоровых добровольцев. СКК готовили нанесением на фильтровальный бланк с последующим просушиванием в течение 2 ч. ДНК выделяли сорбентным методом с использованием набора ДНК-Сорб-B (ООО «ИЛС», Россия). Мутации V617F в гене JAK2, c.1092_1143del и c.1154_1155insTTGTC в гене CALR выявляли с помощью наборов с использованием аллель-специфической полимеразной цепной реакции в режиме реального времени. Мутации W515L и W515K в гене MPL определяли в соответствии с методом, разработанным A. Pancrazzi и соавт. (2008). Результаты. Результаты тестирования жидких и сухих образцов крови полностью совпадали между собой по выявляемости исследуемых мутаций. В количественном тесте также показана высокая степень корреляции (r=0,96, р0,05) уровня аллельной нагрузки V617F JAK2 между результатами тестирования жидкой крови и СКК. Выводы. Полное совпадение результатов тестирования цельной крови и образцов СКК на основные диагностически важные мутации в генах JAK2, CALR и MPL и высокая корреляционная зависимость количественных результатов тестирования аллельной нагрузки JAK2V617F позволяют предложить использование технологии тестирования образцов СКК как для первичной диагностики, так и для мониторинга эффективности терапии хронических миелопролиферативных неоплазий. Determination of somatic mutations in the genes of Janus kinase 2 (JAK2), calreticulin (CALR) and thrombopoietin receptor (MPL) are included in the WHO’s clinical recommendations as major diagnostic criteria for chronic myeloproliferative neoplasms (MPN). However, the high costs of rare molecular genetic tests limits the availability and timeliness of diagnosis. Storage and transport tubes of venous blood is associated with certain difficulties in ensuring the safety and reliability of preanalytical stage. An alternative to use of genetic research is blood collecting on a special paper — dried blood spot (DBS). The Russian Federation has not yet been validated methods for detection of driver mutations in chronic myeloid tumors of DBS samples. Purpose of this investigation is compare the results of identify mutations in the JAK2, CALR and MPL genes when using the venous blood samples or the DBS specimens. Material and methods. The study was conducted on blood samples 105 patients with verified diagnosis MPN. DBS was prepared by drawing blood on the Whatman FTA card. DNA was isolated by «DNA-Sorb B» («Interlabservice», Russia). V617F JAK2 mutation and mutation in exon 10 of the CALR gene was detected by previously developed in our laboratory sets for RT-PCR method. Mutations in exon 9 of MPL gene was performed in accordance with the method, designed by A. Pancrazzi et al. Results. The results of the test liquid and DBS samples were identical to each other on all mutations detection. The quantitative test shows high rate correlation (r=0,96, р0,05) the level of the JAK2 V617F allele burden between the results of the testing of liquid blood and the DBS. Conclusions. Test results indicate safety genomic DNA in the DBS during storage for at least 8 days at room temperature. Method RT-PCR determination of somatic mutations in the JAK2 gene, CALR and MPL in the DBS for the purpose of differential diagnosis of MPN is recommended for sampling in remote regions for subsequent analysis in specialized laboratories.

Журнал: Лабораторная служба

Выпуск журнала: Т. 6, № 3

Номера страниц: 178-181

ISSN журнала: 23052198

Место издания: Москва

Издатель: Общество с ограниченной ответственностью Издательство Медиа Сфера

• Горбенко А.С. (Красноярский филиал ФГБУ «Гематологический научный Центр» Минздрава России)
• Столяр М.А. (ФГБУН Федеральный исследовательский центр «Красноярский научный Центр Сибирского отделения РАН»)
• Ольховский И.А. (ФГБУН Федеральный исследовательский центр «Красноярский научный Центр Сибирского отделения РАН»)

• РИНЦ (eLIBRARY.RU)
• Список ВАК