ВЫСОКОЧУВСТВИТЕЛЬНЫЙ И БЫСТРЫЙ МЕТОД ВЫЯВЛЕНИЯ ДНК-ФРАГМЕНТОВ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ФОТОПРОТЕИНА ОБЕЛИНА КАК РЕПОРТЕРА

Тип публикации: статья из журнала

Год издания: 2008

Аннотация: Рекомбинантный Са2+-активируемый фотопротеин обелин использовали в качестве репортерного белка при проведении биолюминесцентного твердофазного анализа ДНК методом молекулярной гибридизации. Олигонуклеотидные зонды иммобилизовали на поверхности мелкодисперсного полимера или микробиологических планшет различных видов. В качестве выявляемой ДНК-матрицы использовали 30-звенный олигонуклеотид или его производное с остатком биотина на 3-конце, а также денатурированный двухцепочечный ПЦР-фрагмент вируса гепатита С (ВГС), в состав которого входила последовательность 30-звенного олигонуклеотида. Мечение зонда в составе гибридизационного комплекса проводили ферментативным удлинением цепи с помощью <i>Taq</i>-ДНК-полимеразы в присутствии биотинилированного дезоксиуридинтрифосфата. Результаты биолюминесцентного анализа сравнивали с результатами колориметрического анализа, полученными при использовании в качестве репортера щелочной фосфатазы. Показано, что использование биолюминесцентной обелиновой метки позволяет существенно ускорить процедуру выявления ДНК, обеспечивая при этом высокую чувствительность анализа (не ниже 10-15 моль ДНК-матрицы), и дает возможность количественной оценки содержания ДНК-матрицы в анализируемом образце.

Ссылки на полный текст

Издание

Журнал: Биоорганическая химия

Выпуск журнала: Т.34, 6

Номера страниц: 792-798

ISSN журнала: 01323423

Место издания: Москва

Издатель: Федеральное государственное унитарное предприятие Академический научно-издательский, производственно-полиграфический и книгораспространительский центр Наука

Авторы

  • Борисова В.В. (Институт биофизики СО РАН, 660036, Красноярск, Академгородок, стр. 50)
  • Пышная И.А. (Институт химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН, Новосибирск)
  • Пышный Д.В. (Институт химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН, Новосибирск)
  • Франк Л.А. (Институт биофизики СО РАН, 660036, Красноярск, Академгородок, стр. 50)

Вхождение в базы данных

Информация о публикациях загружается с сайта службы поддержки публикационной активности СФУ. Сообщите, если заметили неточности.

Вы можете отметить интересные фрагменты текста, которые будут доступны по уникальной ссылке в адресной строке браузера.