Разработка и сравнительная апробация методик для повышения чувствительности определения мутации V617F в гене JAK2 методом пиросеквенирования

Тип публикации: статья из журнала

Год издания: 2017

Идентификатор DOI: 10.18821/0869-2084-2017-62-2-125-128

Ключевые слова: Jak2, COLD-ПЦР, аллель-специфичная ПЦР, хронические миелопролиферативные заболевания, пиросеквенирование, COLD polymerase chain reaction, Allele-specific polymerase chain reaction, chronic myelo-proliferative diseases, pyro-sequencing

Аннотация: Чувствительность методов, используемых для обнаружения соматической мутации V617F в гене JAK2, определяет возможности раннего выявления хронических миелопролиферативных опухолей (ХМО). Мутация V617F также может быть обнаружена у лиц, не имеющих развернутой картины гематологических заболеваний, и определение мутации даже в низких концентрациях ассоциировано с повышением риска церебрального инсульта и тромбоза артериальных и венозных сосудов. Цель данной работы заключалась в разработке методик, основанных на COLD-ПЦР и аллель-специфичной ПЦР, направленных на повышение чувствительности выявления мутации V617F, определяемой с помощью пиросеквенирования. Аналитическую чувствительность методик оценивали на контрольных образцах с различными соотношениями аллелей. Для аллель-специфичной ПЦР аналитическая чувствительность составила 0,25% мутантного аллеля при концентрации анализируемого контрольного образца 103 копий ДНК/мкл; для COLD-ПЦР - 0,5% при концентрации 104 копий ДНК/мкл. Проведена сравнительная апробация методик на клиническом материале, полученном от 106 пациентов с подозрением на ХМО. При исследовании клинических образцов методом COLD-ПЦР было обнаружено 13 (14%), а методом аллель-специфичной ПЦР - 15 (16%) положительных образцов. Во всех 15 случаях обнаружения мутации было получено клиническое подтверждение диагноза ХМО. Предложенные методики позволяют увеличить эффективность амплификации мутантной ДНК в исследуемых образцах и тем самым повысить чувствительность последующего анализа продуктов амплификации методом пиросеквенирования, что позволяет рекомендовать использование методик для подтверждения диагноза ХМО и раннего выявления лиц с повышенным риском развития венозных и артериальных тромбозов.

Ссылки на полный текст

Издание

Журнал: Клиническая лабораторная диагностика

Выпуск журнала: Т.62, 2

Номера страниц: 125-128

ISSN журнала: 08692084

Место издания: Москва

Издатель: Открытое акционерное общество Издательство Медицина

Авторы

  • Дунаева Елена Алексеевна (ФБУН «Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии» Роспотребнадзора)
  • Миронов К.О. (ФБУН «Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии» Роспотребнадзора)
  • Субботина Т.Н. (ФГБУ «Гематологический научный центр» Минздрава России)
  • Ольховский И.А. (ФГБУН «Красноярский научный центр» Сибирского отделения РАН)
  • Шипулин Г.А. (ФБУН «Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии» Роспотребнадзора)

Вхождение в базы данных

Информация о публикациях загружается с сайта службы поддержки публикационной активности СФУ. Сообщите, если заметили неточности.

Вы можете отметить интересные фрагменты текста, которые будут доступны по уникальной ссылке в адресной строке браузера.