Сибирский федеральный университет

Перевод названия: METHOD OF SIMULTANEOUS DETECTION OF TWO ANALYTES THROUGH BIOLUMINESCENT MOLECULAR MICROANALYSIS

Тип публикации: патент

Год издания: 2009

Аннотация: p num="32"Изобретение относиться к области биохимии, а именно к способам проведения иммуноферментного и ДНК-гибридизационного анализа. Предлагается конъюгат для биолюминесцентного молекулярного микроанализа, полученный из фермента, соединенного с биоспецифическим реагентом, где в качестве фермента используют Са2+ зависимый фотопротеин обелин с измененным спектром биолюминесценции: рекомбинантный обелин W92F; H22E или рекомбинантный обелин Y138F. Способ одновременного определения двух аналитов биолюминесцентным молекулярным микроанализом включает в себя обработку твердой фазы биоспецифическими реагентами, отделение непрореагировавшей жидкой фазы, обработку твердой фазы ферментсодержащим конъюгатом, разделение жидкой и твердой фаз и анализ твердой фазы. При этом в качестве биоспецифического реагента для первой обработки твердой фазы используют два иммуноглобулина или один иммуноглобулин с двойной специфичностью или два разных олигонуклеотида. Конечную обработку твердой фазы проводят одновременно двумя коньюгатами, состоящими, соответственно, из рекомбинантных обелинов с разными спектрами биолюминесценции и молекул с разной биоспецифичностью, где в качестве рекомбинантных обелинов используют W92F; H22E и рекомбинантный обелин Y138F с последующим анализом на двухканальном биолюминометре с широкополосными светофильтрами. Использование данного способа позволяет более точно, быстро, универсально и технологично проводить биолюминесцентный способ молекулярного микроанализа 2 н.п. ф-лы, 3 ил. /p p num="33"FIELD: chemistry; biochemistry./p p num="34"SUBSTANCE: invention relates to biochemistry, more specifically to methods of carrying out immunoenzymometric and DNA-hybridisation analysis. A conjugate is proposed for bioluminescent molecular microanalysis, obtained from an enzyme, which is bonded to a biospecific reagent, where the enzyme used is Ca2+ regulated photoprotein obelin with an altered bioluminescent spectrum: recombinant obelin W92F; H22E or recombinant obelin Y138F. The method for simultaneous detection of two analytes through bioluminescent molecular microanalysis involves treating a solid phase with biospecific reagents, separation of unreacted liquid phase, treatment of the solid phase with an enzyme containing conjugate, separation of the liquid and solid phases and analysis of the solid phase. The biospecific reagent used for the first treatment of the solid phase is two immumoglobulins or one immunoglobulin with double specificity or two different oligonucleotides. Final treatment of the solid phase is done simultaneously with two conjugates, which respectively consist of recombinant obelins with different bioluminescent spectra and molecules with different biospecificity, where the recombinant obelins used are W92F;H22E and recombinant obelin Y138F with subsequent analysis on a double-channel bioluminometre with broad-band light filters./p p num="35"EFFECT: use of this invention allows for accurate, fast, universal and easy realisation of the method of bioluminescent molecular microanalysis./p p num="36"4 ex, 3 dwg, 2 cl /p

• Борисова Василиса Валерьевна
• Франк Людмила Алексеевна
• Маркова Светлана Владимировна
• Высоцкий Евгений Степанович

• РИНЦ (eLIBRARY.RU)