Использование гетеродуплексного анализа и пиросеквенирования в алгоритме диагностики истинной полицитемии, ассоциированной с соматическими мутациями в 12 экзоне гена JAK2

Перевод названия: Heteroduplex analysis and pyrosequencing in the diagnostic algorithm of polycythemia vera associated with JAK2 exon 12 mutations

Тип публикации: статья из журнала

Год издания: 2017

Идентификатор DOI: 10.17116/labs20176129-33

Ключевые слова: exon 12 JAK2 mutations, myeloproliferative neoplasms, polycythemia vera, Heteroduplex analysis, мутации в 12-м экзоне гена JAK2; миелопролиферативные опухоли; истинная полицитемия; гетеродуплексный анализ

Аннотация: Соматические мутации в 533—547 кодонах 12-го экзона гена JAK2 высокоспецифичны для подтверждения диагноза истинной полицитемии (ИП). Частота встречаемости таких мутаций среди больных составляет от 3 до 23% в разных этнических группах. Ранее нами был предложен метод анализа мутаций в 12-м экзоне гена JAK2 в количественном формате методом пиросеквенирования. Вместе с тем высокая стоимость секвенирования определяет необходимость разработки двухэтапного алгоритма тестирования с предварительным использованием более доступного скринингового теста. Цель — продемонстрировать возможность использования метода гетеродуплексного анализа с последующим электрофорезом в полиакриламидном геле (ПААГ) для выявления ИП-специфических мутаций в 12-м экзоне гена JAK2 в качестве предварительного скринингового теста. Материал и методы. В работе были использованы пробы венозной крови: 28 женщин (средний возраст 53,1±14,9 года) и 112 мужчин (средний возраст 44,2±15,2 года), направленных врачами-гематологами с подозрением на ИП. После выделения ДНК проводили ПЦР с дополнительным этапом образования гетеродуплексов с использованием набора реагентов ПЦР-комплект («Синтол», Москва) на приборе CFX-96 («Bio-Rad», США). ПЦР-продукты детектировали методом электрофореза в 8% ПААГ. Подтверждение, идентификацию и количественный анализ уровня аллельной нагрузки выявленных мутаций проводили методом пиросеквенирования на приборе PyroMark Q24 («Qiagen», Германия). Результаты. Среди всех V617F-негативных пациентов, обследованных нами, использование метода гетеродуплексного анализа с последующим электрофорезом в ПААГ позволило идентифицировать 4 образца, содержащие мутации в области 12-го экзона гена JAK2. Тип мутации для этих пациентов определен методом пиросеквенирования: N542-E543del (c.1624_1629delAATGAA); I540-E543delinsKK (с.1619_1627 TCAgAAATg<AAA); N542_E543del (c.1623_1628delAAATGA) и R541_E543>K (c.1622_1627delGAAATG). Выводы. Предлагаемый вариант гетеродуплексного анализа с детекцией в ПААГ может быть рекомендован к использованию как скрининговый тест, предшествующий подтверждающему количественному тесту в реакции пиросеквенирования. Двухэтапный подход позволяет оптимизировать алгоритм и повысить эффективность тестирования пациентов с подозрением на мутации в 12 экзоне гена JAK2.

Ссылки на полный текст

Издание

Журнал: Лабораторная служба

Выпуск журнала: Т.6, 1

Номера страниц: 29-33

ISSN журнала: 23052198

Место издания: Москва

Издатель: Общество с ограниченной ответственностью Издательство Медиа Сфера

Авторы

  • Субботина Т.Н. (Красноярский филиал Гематологический научный центр Минздрава России)
  • Харсекина А.Е. (Сибирский федеральный университет)
  • Дунаева Е.А. (Центральный НИИ эпидемиологии Роспотребнадзора)
  • Миронов К.О. (Центральный НИИ эпидемиологии Роспотребнадзора)
  • Васильев Е.В. (Краевая клиническая больница)
  • Михалёв М.А. (Городская клиническая больница №7)
  • Хоржевский В.А. (Красноярское краевое патолого-анатомическое бюро)
  • Ольховский И.А. (Красноярский научный Центр Сибирского отделения РАН, Красноярск)
  • Шипулин Г.А. (Центральный НИИ эпидемиологии Роспотребнадзора)

Вхождение в базы данных

Информация о публикациях загружается с сайта службы поддержки публикационной активности СФУ. Сообщите, если заметили неточности.

Вы можете отметить интересные фрагменты текста, которые будут доступны по уникальной ссылке в адресной строке браузера.