Функция белка в конверсии энергии химических связей в свет Са2+-активируемыми люциферазами

Перевод названия: The protein moiety function in chemical bonds' energy conversion into light by Ca2+- activated luciferases

Тип публикации: отчёт о НИР

Год издания: 1998

Аннотация: Методом олигонуклеотид-направленного мутагенеза получены мутантные варианты обелина с заменой аспарагиновой и глутаминовой кислот на аланин и глицин соответственно в 11 и 12 положениях в I, II, III, I+II, I+III, II+III, I+II+III Ca2+-связывающих доменах обелина. Для мутантных вариантов обелина исследована кинетика люминесцентного ответа и определена чувствительность к ионам кальция. Проведенные аминокислотные замены вызывают изменения: а) чувствительности мутантных вариантов обелина к кальцию; б) наклона кривой зависимости интенсивности люминесценции от концентрации кальция; в) кинетики люминесцентного сигнала. Mg2+ в концентрации 10 мМ, как правило, уменьшает амплитуду люминесцентного ответа и изменяет его характер, а также сдвигает кривую зависимости интенсивности люминесценции от [Ca2+] в область более высоких концентраций кальция. Используя диэтилпирокарбонат (DEPC) для селективной модификации гистидина, определено количество "доступных" аминокислотных остатков в молекуле апообелина и фотопротеиновом комплексе: апообелин-целентеразин- О2, а также исследовано влияние этих модификаций на способность апобелка образовывать активный комплекс и на способность фотопротеинового комплекса к люминесценции. Из пяти гистидиновых остатков обелина в апобелке DEPC модифицируется только один. После модификации апобелок практически полностью теряет способность к образованию фотопротеинового комплекса. Образование активного комплекса апообелин-целентеразин-О2, т.е. связывание субстратов с белком, защищает от модификации гистидиновый остаток. При помощи ДТНБ определено количество свободных SH-групп: а) в молекуле апообелина в отсутствие Ca2+; б) когда Са2+-связывающие домены апообелина насыщены Ca2+; в) в молекуле обелина, связанного с целентеразином. Во всех трех состояниях из пяти цистеиновых остатков в свободном состоянии находится один, но скорость модификации SH-группы зависит от состояния, в котором находится фотопротеин. Наибольшая скорость модификации наблюдается для апообелина в отсутствие Са2+, наименьшая - для обелина связанного с целентеразином. После модификации SH-группы апообелин полностью теряет способность связывать целентеразин, которая частично восстанавливается при добавлении избытка дитиотреитола. Модификация SH-группы обелина, связанного с целентеразином, вызывает люминесценцию фотопротеина.

Ссылки на полный текст

Авторы

Вхождение в базы данных

Информация о публикациях загружается с сайта службы поддержки публикационной активности СФУ. Сообщите, если заметили неточности.

Вы можете отметить интересные фрагменты текста, которые будут доступны по уникальной ссылке в адресной строке браузера.