Использование метода пиросеквенирования для выявления и количественной оценки аллельной нагрузки мутаций в 12-м экзоне гена JAK2

Тип публикации: статья из журнала

Год издания: 2016

Идентификатор DOI: 10.18821/0234-5730-2016-61-4-196-200

Ключевые слова: мутации в 12-м экзоне гена JAK2, миелопролиферативные заболевания, истинная полицитемия, пиросеквенирование, exon 12 JAK2 mutations, Myeloproliferative disease, polycythemia vera, pyrosequencing, light induced gratings, pulse propagation, Raman gain

Аннотация: Соматические мутации в кодонах 532-547 12-го экзона гена JAK2 высокоспецифичны для подтверждения диагноза истинной полицитемии. Цель настоящей работы - разработка методики для обнаружения и количественной оценки уровня аллельной нагрузки данных мутаций с использованием технологии пиросеквенирования. Определение нуклеотидной последовательности проводили на приборе PyroMark Q24. Для верификации наличия мутаций выполняли клонирование ДНК, выделенной из клинических образцов. Секвенирование клонов проводили с использованием реагентов и оборудования фирмы "Applied Bbsystems" (США). После подтверждения наличия мутации в клонах методом Сэнгера, образец, содержащий мутацию, повторно анализировали на приборе PyroMarkQ24 в количественном формате для определения уровня аллельной нагрузки. Среди 48 образцов ДНК от пациентов с высокой клинико-гематологической вероятностью диагноза истинной полицитемии и отсутствием мутации V617F в 14-м экзоне гена JAK2 был идентифицирован один образец, содержащий наиболее распространенную в области 12-го экзона данного гена соматическую мутацию N542-E543 del. Определение уровня аллельной нагрузки проводили трижды в динамике развития заболевания с августа 2013 г. по июнь 2015 г. Полученные результаты свидетельствуют о том, что в ходе развития заболевания аллельная нагрузка у пациента возрастает и за 23 мес наблюдения этот показатель вырос более чем в 2 раза, что свидетельствует о соответствующем увеличении количества клеток трансформированного клона. В то же время до настоящего момента у пациента наблюдается клинико-гематологическая компенсация заболевания на фоне проведения умеренных терапевтических воздействий - эксфузионной и дезагрегационной терапии. Предложенная методика позволяет детектировать мутации в анализируемом фрагменте, а также проводить количественный мониторинг аллельной нагрузки в динамике заболевания с целью контроля эффективности используемой терапии.

Ссылки на полный текст

Издание

Журнал: Гематология и трансфузиология

Выпуск журнала: Т.61, 4

Номера страниц: 196-200

ISSN журнала: 02345730

Место издания: Москва

Издатель: Открытое акционерное общество Издательство Медицина

Авторы

  • Субботина Татьяна Николаевна (ФГАОУ ВО «Сибирский федеральный университет»)
  • Дунаева Е.А. (ФБУН «Центральный НИИ эпидемиологии» Роспотребнадзора)
  • Миронов К.О. (ФБУН «Центральный НИИ эпидемиологии» Роспотребнадзора)
  • Дрибноходова О.П. (ФБУН «Центральный НИИ эпидемиологии» Роспотребнадзора)
  • Харсекина А.Е. (ФГБУ «Гематологический научный центр» Минздрава России)
  • Васильев Е.В. (КГБУЗ Краевая клиническая больница)
  • Хоржевский В.А. (КГБУЗ Красноярское краевое патолого-анатомическое бюро)
  • Ольховский И.А. (ФГБУН «Красноярский научный центр» Сибирского отделения РАН)
  • Шипулин Г.А. (ФБУН «Центральный НИИ эпидемиологии» Роспотребнадзора)

Вхождение в базы данных

Информация о публикациях загружается с сайта службы поддержки публикационной активности СФУ. Сообщите, если заметили неточности.

Вы можете отметить интересные фрагменты текста, которые будут доступны по уникальной ссылке в адресной строке браузера.